IHC 染色中的色素干擾問題

⚠️ 重要提醒

在進行任何黑色素漂白處理前，務必先在一個測試切片上進行條件摸索，以評估其對目標抗原的影響，避免過度處理導致抗原性喪失。

含鐵血黃素在 IHC 染色中造成的挑戰與應對策略是什麼？

含鐵血黃素（Hemosiderin）是鐵儲存蛋白複合物，通常呈金黃色至棕色顆粒狀，多見於出血區域、慢性炎症或鐵超載的組織中。在 IHC 染色中，其顏色與 DAB 顯色劑的棕色信號相似，會造成判讀上的混淆。

含鐵血黃素的干擾在脾臟、肝臟、肺部以及慢性出血病灶中尤為常見。根據 CAP（College of American Pathologists）的指南，正確識別和處理含鐵血黃素是病理診斷標準化的重要環節。

含鐵血黃素的形態學特徵與特異性鑑定

含鐵血黃素的識別特徵為細胞內或細胞外聚集的粗大、不規則的金黃色或棕色顆粒。這些顆粒在 H&E 染色下清晰可見。

特異性鑑定含鐵血黃素最常用的方法是普魯士藍染色（Prussian Blue Stain）。該染色法能特異性地顯示組織中的三價鐵離子，將含鐵血黃素染成鮮豔的藍色，而其他色素則不著色。這有助於區分含鐵血黃素與黑色素或脂褐素。

去除含鐵血黃素的化學方法

去除含鐵血黃素主要依賴其鐵成分的化學反應。常用的方法包括酸性脫鐵。

1. 酸性脫鐵：使用稀鹽酸（如 0.1-0.5% HCl）或草酸溶液處理組織切片 10-30 分鐘，可以將含鐵血黃素中的鐵離子溶解，從而達到脫色效果。此方法相對溫和，對抗原的損傷較小，但需注意控制處理時間和酸的濃度。
2. 螯合劑處理：某些螯合劑如 EDTA 也能與鐵離子結合，但其效果通常不如酸性脫鐵直接。

選擇性顯色：如果無法完全去除含鐵血黃素，可以考慮使用非棕色的顯色系統，如上述的 Fast Red 或 BCIP/NBT，以避免顏色重疊。這在評估鐵代謝相關疾病的 IHC 標記時尤其有用。

「在處理含鐵血黃素時，普魯士藍染色是鑑別診斷的金標準，而適度的酸性脫鐵處理則能在不顯著影響抗原性的前提下，有效降低背景干擾。」

— College of American Pathologists (CAP) Histotechnology Committee Guidelines, 2018

脂褐素對 IHC 判讀的影響及如何有效消除？

脂褐素（Lipofuscin）是一種細胞衰老色素，由細胞內脂質和蛋白質的氧化產物堆積形成，常見於心肌細胞、神經元、肝細胞和腎小管上皮細胞等長壽命細胞中。其在組織中呈現黃棕色至棕色顆粒，在 IHC 染色中可能被誤認為陽性信號。

脂褐素的干擾在老年患者的組織樣本中尤為突出，其非特異性染色會增加背景噪音，降低信號與噪音比。例如，在神經退行性疾病的研究中，脂褐素的積累常與病理改變並存，使得相關 IHC 標記的判讀更具挑戰性。

脂褐素的形態學特點與鑑別方法

脂褐素的識別特徵為細胞質內不規則的、黃棕色顆粒，通常位於細胞核附近。它在 H&E 染色下可見，且具有自發螢光特性，在螢光顯微鏡下（通常在藍光激發下）會發出黃綠色或橙紅色螢光。

鑑別方法除了自發螢光，還可利用其抗酸性。脂褐素對稀酸不敏感，這有助於將其與含鐵血黃素區分開來。此外，Schmorl 染色可以將脂褐素染成藍綠色。

脂褐素干擾的處理策略

去除脂褐素比去除黑色素或含鐵血黃素更具挑戰性，因為它對許多化學試劑具有較強的抵抗性。目前尚無完全有效且不損害抗原性的標準去除方法。